Чард Т. «Радиоиммунологические методы» 1981 год
Автор: Чард Т.
Год: 1981
Практическое руководство, в котором известный английский иммунолог рассматривает основные приемы радиоиммунологического определения следовых количеств физиологически активных веществ, в том числе белковых и стероидных гормонов, канцерогенов, лекарственных препаратов. Книга содержит подробный методический материал и хорошо иллюстрирована.
Предназначена для биологов всех специальностей, пользующихся современными методами биохимии и молекулярной биологии, для врачей-лаборантов, студентов, аспирантов и преподавателей университетов, медицинских, педагогических и сельскохозяйственных институтов.
Предисловие
Список сокращений
Глава 1. Предпосылки иммунологического метода анализа
1.1. Введение
1.2. Терминология
1.3. Начальные этапы развития радиоиммунологии
1.4. Основные принципы методов связывания
1.5. Кривые разведения связывающего агента и калибровочные кривые
1.6. Способы построения калибровочной кривой
1.7. Важное значение величины К
1.8. Измерение величины К
1.9. Система, моделирующая метод связывания
1.10. Некоторые примеры использований модельной системы
Глава 2. Условие применения метода связывания — наличие очищенного лиганда
2.1. Требования, предъявляемые методом связывания
2.2. Необходимость очищенного лиганда
2.3. Доступность чистого лиганда
2.3.1. Крупные гормоны белковой природы
2.3.2. Канцероплодные антигены
2.3.3. Стероидные гормоны и лекарственные препараты
2.3.4. Небольшие пептидные гормоны
2.4. Различие между очищенным и эндогенным лигандом
2.5. Стандарты
2.6. Хранение материалов
Глава 3. Условие применения метода связывания — наличие меченого лиганда
3.1. Радиоактивные изотопы
3.2. Определение радиоактивных изотопов
3.3. Выбор счетчика
3.4. Некоторые практические аспекты измерения радиоактивности
3.5. Основные характеристики меченого лиганда
3.6. Приготовление меченых лигандов
3.7. Лиганды, меченные изотопами йода
3.7.1. Методы йодирования
3.7.2. Практические аспекты йодирования
3.7.3. Повреждения лиганда, вызываемые йодированием
3.7.4. Очистка йодированного лиганда
3.7.5. Химический контроль меченого лиганда
3.8. Альтернативные типы меток
3.8.1. Флуоресцентная метка
3.8.2. Ферментные метки
3.8.3. Свободнорадикальные метки
3.8.4. Возможность использования бактериофага в качестве метки
Глава 4. Условие применения метода связывания — наличие связывающего агента
4.1. Необходимые характеристики связывающего агента
4.2. Антитела
4.2.1. Химия антител
4.2.2. Химия антигенов
4.2.3. Клеточная основа иммунной реакции
4.2.4. Физиология иммунной реакции
4.2.5. Характеристики антител, имеющие значение для методов связывания
4.2.6. Получение антител
4.2.7. Природа и доза иммуногена
4.2.8. Использование гаптенов в качестве иммуногенов
4.2.9. Использование адъюванта
4.2.10. Виды животных
4.2.11. Способ иммунизации
4.2.12. Последовательность инъекций и сбора антисыворотки
4.2.13. Отбор антисывороток для использования в радиоиммунологическом методе анализа
4.2.14. Хранение антисывороток
4.3. Клеточные рецепторы
4.4 Связывающие белки плазмы
4.5. Иммунорадиометрический метод анализа эндогенных антител и связывающих белков крови
Глава 5. Условие применения метода связывания — наличие способа разделения свободного и связанного лиганда
5.1. Эффективность методов разделения
5.2. Практичность методов разделения
5.8. Методы разделения свободного и связанного лиганда
5.3.1. Электрофорез
5.3.2. Гель-фильтрация
5.3.3. Методы адсорбции
5.3.4. Фракционное осаждение
5.3.5. Методы двойных антител
5.3.6. Твердофазные системы
5.3.7. Заключение. Выбор методики разделения
5.4. Иммунорадиометрические методы анализа
5.4.1. Преимущества и недостатки иммунорадиометрического метода анализа
Глава 6. Условие применения метода связывания — экстрагирование лиганда из биологических жидкостей
6.1. Экстрагирование с целью концентрирования лиганда
6.1.1. Методы экстракции и концентрирования, основанные на применении мелкозернистых адсорбентов
6.2. Экстракция с целью очистки лиганда
6.2.1. Экстракция с целью повышения специфичности
6.2.2. Экстракция с целью освобождения лиганда из конъюгатов или комплексов
6.3. Общие черты методов экстракции
Глава 7. Условие применения метода связывания — расчет результатов анализа
7.1. Расчет результатов путем простой экстраполяции от руки
7.2. Линеаризация калибровочной кривой
7.3. Электронная аппаратура для расчета результатов
7.4. Определение доверительных пределов при интерпретации результатов анализа
Глава 8. Характеристика метода связывания: чувствительность
8.1. Определение понятия "чувствительность"
8.2. Пути повышения чувствительности метода связывания
8.2.1. Уменьшение количества меченого лиганда
8.2.2. Уменьшение количества связывающего агента
8.2.3. Увеличение времени инкубации
8.2.4. Уменьшение продолжительности инкубации — неравновесный метод анализа
8.2.5. Порядок добавления реагентов
8.2.6. Очистка связывающего агента
8.2.7. Увеличение объема образца
8.2.8. Температура инкубации
8.2.9. Увеличение числа параллельных проб
8.2.10. Экстракция, и концентрирование
8.3. Способы снижения чувствительности анализа
8.4. Практическая целенаправленность метода анализа; важное значение интервалов между растворами стандартов
8.5. Оптимизация метода количественного определения с помощью теоретического анализа
8.6. Выводы
Глава 9. Характеристика метода связывания: специфичность
9.1. Определение понятия "специфичность"
9.2. Специфическая неспецифичность
9.2.1. Основа специфической неспецифичности
9.2.2. Идентификация специфической неспецифичности
9.2.3. Методы повышения специфичности
9.3. Неспецифическая неспецифичность
9.3.1. Присутствие веществ, препятствующих взаимодействию между связывающим агентом и лигандом
9.3.2. Разброс величины холостой пробы в образцах
9.3.3. Разрушение или инактивация связывающего агента или меченого лиганда
9.3.4. Разрушение или инактивация немеченого лиганда
9.3.6. Обнаружение и устранение неспецифической неспецифичности
Глава 10. Характеристика метода связывания: точность
10.1. Определения
10.2. Факторы, влияющие на точность
10.2.1. Ошибки, связанные с реагентами и методикой
10.2.2. Ошибки, связанные с техникой проведения анализа
10.3. Способы проверки точности методов связывания
10.3.1. Приготовление материалов для контроля качества анализа с целью проверки точности
10.3.2 Определение точности с помощью препаратов, предназначенных для контроля качества
10.3.3. Другие способы проверки точности
10.4. Пути оптимизации точности анализа
Глава 11. Характеристика метода связывания: взаимосвязь с другими видами анализа
11.1. Определение
11.2. Рецепторный метод анализа
11.3. Методы анализа, основанные на использовании связывающих белков плазмы
11.4. Иммунологические методы анализа
11.6. Резюме
Глава 12. Автоматизация аналитических операций
12.1. Общие положения
12.2. Идентификация и отбирание образца
12.3. Добавление реагентов
12.4. Инкубация
12.5. Разделение свободного и связанного лиганда
12.6. Измерение радиоактивности
12.7. Расчет результатов
12.8. Резюме
Глава 13. Организация аналитической службы
13.1. Кто должен проводить радиоиммунологический анализ?
13.2. Организация аналитической лаборатории
13.3. Организация аналитической службы
Приложения
Приложение I
Приложение II
Приложение III
Приложение IV
Приложение V
Список литературы
Предметный указатель